روش تولید آنزیمهای DNA پلیمراز Taq و Pfu
نویسنده
چکیده مقاله:
آنزیمهای پلیمر کننده DNAی Taq و Pfu از آنزیمهای بسیار مهم در مطالعات ژنتیک مولکولی هستند و در آزمایشگاههای مولکولی در حجم زیادی مورد استفاده قرار میگیرند. این تحقیق به منظور تامین آنزیمهای یاد شده جهت آزمایشگاههای پرمصرف و یک روش ساده خالص کردن این آنزیمها از بقایای باکتری انجام گردید. ابتدا پلاسمیدهای حامل ژنهای تولید کننده آنزیمهای Taq و Pfu به طور جداگانه به نژادی از باکتری E. coli منتقل شد. باکتریهای تراریخته بر روی محیط‌کشت 2x SOB به مدت 5/4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت شده و بعد آنزیم تولید گردید، آنزیمهای مورد نظر با روش خاصی که در تحقیق حاضر ارائه گردیده استخراج و خالص سازی گردیدند. به منظور آزمون کارآیی و تعیین میزان پرکننده مورد نیاز جهت رساندن غلظت آنزیم به سطح مطلوب از ماده رنگ‌آمیزی Bradford استفاده گردید. کارآئی و خلوص آنزیمهای تولید شده در مقایسه با آنزیم تجاری موجود در آزمایشگاه در تکثیر قطعهای از DNA ژنوم گیاه آرابیدوپسیس اکوتیپ کلمبیا توسط PCR مورد تأیید قرار گرفت. بنابراین روش ارائه شده در این تحقیق برای تولید آزمایشگاهی و محلی آنزیمهایTaq و Pfu با خلوص بالا توصیه میگردد.
منابع مشابه
روش تولید آنزیم های dna پلیمراز taq و pfu
آنزیمهای پلیمر کننده dnaی taq و pfu از آنزیمهای بسیار مهم در مطالعات ژنتیک مولکولی هستند و در آزمایشگاههای مولکولی در حجم زیادی مورد استفاده قرار میگیرند. این تحقیق به منظور تامین آنزیمهای یاد شده جهت آزمایشگاههای پرمصرف و یک روش ساده خالص کردن این آنزیمها از بقایای باکتری انجام گردید. ابتدا پلاسمیدهای حامل ژنهای تولید کننده آنزیمهای taq و pfu به طور جداگانه به نژادی از باکتری e. coli ...
متن کاملDNA sequencing using Taq polymerase.
Three DNA polymerases, namely E.coli DNA polymerase 1 (Klenow), reverse transcriptase and T7 DNA polymerase (sequenase), are commonly used for DNA sequencing by the chain termination method of Sanger and colleagues [1). However, the secondary structure of the DNA template can impede the progress of all three polymerases. I have developed a novel procedure in which the thermostable polymerase of...
متن کاملNucleotide-mimetic synthetic ligands for DNA-recognizing enzymes One-step purification of Pfu DNA polymerase.
The commercial availability of DNA polymerases has revolutionized molecular biotechnology and certain sectors of the bio-industry. Therefore, the development of affinity adsorbents for purification of DNA polymerases is of academic interest and practical importance. In the present study we describe the design, synthesis and evaluation of a combinatorial library of novel affinity ligands for the...
متن کاملبیان و خالص‌سازی ژن نوترکیب Cold sensitive Taq DNA polymerase در E.coli
سابقه و هدف: آنزیم DNA پلیمراز مقاوم به حرارت بعلت کاربرد آن در PCR و تحقیقات بیولوژی مولکولی توجه زیادی را به خود معطوف ساخته است و در نتیجه اهمیت مطالعه روی DNA پلیمرازهای مقاوم به حرارت مختلف را دو چندان نموده است. هدف از این مطالعه سنجش عملکرد و میزان تولید آنزیم DNA پلیمراز حساس به سرما و مقاوم به حرارت تولید شده در میزبان باکتریایی و خالص‌سازی سریع و ارزان آن می‌باشد. مواد و روش‌ها: ب...
متن کاملSite-directed mutagenesis using Pfu DNA polymerase and T4 DNA ligase.
Here we describe a simple and cost-effective PCR-based method to introduce deletions, point mutations, frame-shift, or truncations with very high efficiency. The scope and additional applications of the method are discussed. Site-directed mutagenesis involves the introduction of mutations at the DNA level to alter the primary amino acid sequence of proteins (1,2). To approach the desired level ...
متن کاملData of expression and purification of recombinant Taq DNA polymerase
Polymerase chain reaction (PCR) technique is widely used in many experimental conditions, and Taq DNA polymerase is critical in PCR process. In this article, the Taq DNA polymerase expression plasmid is reconstructed and the protein product is obtained by rapid purification, ("Rapid purification of high-activity Taq DNA polymerase" (Pluthero, 1993 [1]), "Single-step purification of a thermostab...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
عنوان ژورنال
دوره 17 شماره 1
صفحات 132- 138
تاریخ انتشار 2009-08-23
با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023